Dasselbe

anders

Versuchsobjekt: Gal4-Aktivator eukaryontischer Zellen, der die Transkription des Galactose-Gens von Saccharomyces cerevisiae aktivieren kann

① Domänenaustauschexperiment: Das durch Expression des Gal4-Genfragments (N-terminales 1/3) erhaltene Protein kann normal an DNA binden, aber den Transkriptionsprozess nicht aktivieren. Ein solches Protein enthält eine DNA-Bindungsdomäne, aber keine Aktivierungsdomäne, sodass die DNA-Bindungs- und Transkriptionsaktivierungsdomäne von Gal4 getrennt funktionieren können.

② Hefe-Zwei-Hybrid-Experiment: Konstruieren Sie ein Hybridgen, das die C-terminale 2/3-Sequenz, die das Gal4-Protein kodiert, mit der DNA-Bindungsdomäne des bakteriellen Inhibitorproteins LexA fusioniert. Das resultierende Protein wird in Hefe mit demselben Reporterplasmid exprimiert. Es gibt eine LexA-Bindungsstelle vor dem Plasmid-Gal4-Promotor, und das Fusionsprotein kann die Transkription dieses Reporters aktivieren. Experimente zeigen, dass die Aktivierung nicht nur durch die Bindung an DNA erfolgt dient lediglich dazu, die mit dem Promotor verbundene Aktivierungsdomäne zu binden.

① Homotypdomänenproteine: Ein Proteintyp mit einer DNA-Bindungsdomäne mit Helix-Turn-Helix-Motiv, die auf die gleiche Weise wie bakterielle regulatorische Proteine ​​an DNA bindet

②Zinkhaltige DNA-Bindungsdomäne

③Leucin-Zipper-Domäne: Dieses Protein enthält sowohl eine Dimerisierungsoberfläche als auch eine DNA-Bindungsoberfläche. Dimerisierung: Wechselwirkung mit der hydrophoben Oberfläche (Leucin) der Alpha-Helix; DNA-Bindung: Wechselwirkung mit der symmetrischen DNA-Erkennungsstelle, die letztendlich die DNA wie eine Klammer festklemmt

④Helix-Loop-Helix-Domäne (HLH): Die erweiterte α-Helix-Region in jedem Monomer ist in die Hauptfurche der DNA eingebettet. Sie ähnelt der Struktur des Leucin-Zippers und kann auch Dimere bilden und wird als Basis-Zipper/Basis bezeichnet. sexuelles HLH-Protein

⑤ Hochgeschwindigkeits-Motilitätsprotein (HMG): Die hochkonservierten AY-Haken der Peptidkette können mit der kleinen Furche der DNA-Helix interagieren und die Konformation der DNA-Doppelhelix erheblich verändern.

mit Unsicherheit

Klassifizierung: ①Säureaktivierungszone (am häufigsten Gal4) ②Glutaminreiche Zone (SP1) ③Prolinreiche Zone (CTF1)

Keine allosterische Aktivierung in Eukaryoten

Rekrutierung

Aktion auf Distanz

Synergie

Kombinationssteuerung

Konkurrenz: Konkurrenz mit dem Aktivator um die Bindungsstelle. Durch die Bindung an überlappende Stellen, die Aktivatoren binden, hemmen Repressoren die Bindung von Aktivatoren an Gene und blockieren dadurch die Genaktivierung.

Hemmung: Hemmt die Aktivatorfunktion. Der Inhibitor bindet an eine Stelle neben dem Aktivator und interagiert mit dem Aktivator, wodurch seine Aktivierungsregion sterisch blockiert wird.

Direkte Hemmung: konkurriert mit dem Aktivator um die Bindung an die Polymerase. Der Hemmfaktor bindet an die Stelle vor dem Gen und hemmt die Initiierung der Transkription, indem er auf besondere Weise mit dem Transkriptionsapparat zusammenwirkt.

Indirekte Hemmung: Rekrutierung von Nukleosomenmodifikatoren. Unterdrückt die Transkription durch die Rekrutierung histonmodifizierender Enzyme zur Veränderung von Nukleosomen. Wie Methylierungsmodifikation und Deacetylase-Wirkung.

Beispiele für Signalwege

Signalweg: Das anfängliche Signal/Ligand bindet an die extrazelluläre Domäne des spezifischen Rezeptors auf der Zelloberfläche → das Signal wird an die intrazelluläre Domäne des Rezeptors übertragen (durch Allosterie oder Dimerisierung des Rezeptors) → das Signal wird dann in a übertragen Weiterleitung an den relevanten Transkriptionsregulator → Der Transkriptionsregulator steuert die Expression des Zielgens

Mechanismen, durch die Signale die Aktivität von Transkriptionsregulatoren in eukaryotischen Zellen steuern