Soja, disponible comercialmente

espectrofotómetro tipo 752; espectrómetro de registro UV-visible tipo UV-265; liofilizador tipo PHS-3C;

β-mercaptoetanol, Coomassie Brilliant Blue G-250, acrilamida, SDS

Extracción alcalina y precipitación ácida.

Tasa de extracción de proteínas = contenido de proteína de soja extraída / contenido de proteína en la soja × 100%

Determinación del contenido de proteínas de la muestra.

Lixiviación pH 8

Relación material-líquido 1:14 g/ml

Temperatura de extracción 50 ℃

Tiempo de extracción 60min

Realice experimentos de optimización de la superficie de respuesta basados ​​en las condiciones anteriores.

Tres niveles y cuatro factores

Prepare el gel de agarosa por método húmedo y llénelo en la columna de cromatografía, y use tampón NaCl PBS de 1 mol/l (el tampón se prepara a partir de 50 mmol/l de KH2PO4-Na2HPO4, el valor de pH es 7,6) para el tratamiento de equilibrio. La muestra debe prepararse en tampón PBS. Después de centrifugar para eliminar el sobrenadante, asegúrese de que la concentración de la solución de proteína sea inferior a 10 mg/ml, porque los experimentos han demostrado repetidamente que esta concentración puede lograr una alta tasa de adsorción y un tiempo de equilibrio corto. A continuación, coloque la muestra en la columna, use tampón de fosfato para la elución en gradiente lineal, ajuste el caudal a 1,0 ml/min, recoja un tubo cada 6 ml y utilice un detector UV para detectar a una longitud de onda de 280 nm. Finalmente, las muestras recolectadas se liofilizaron y analizaron mediante el método SDS-PAGE.

Se puede ver en la tabla: el valor F del modelo es 5,65, P <0. 0024, indicando que el modelo es significativo y el ajuste es bueno; el ítem de falta de ajuste P = 0,0737 > 0. 05, lo que indica que el modelo no tiene diferencias significativas, tiene un error pequeño y tiene un alto grado de ajuste. Además, el R2 del modelo alcanza 0,8682, lo que puede explicar el 86,62% de la variación en los valores de respuesta, lo que indica que los resultados previstos son altamente consistentes con los resultados reales. R2adj = 0,7145 indica que el 71,45% de las condiciones de extracción del aislado de proteína de soja se pueden utilizar para el análisis de datos. El grado de influencia de varios factores en la extracción del aislado de proteína de soja es A > C > D > B, es decir, pH de extracción > temperatura de extracción > tiempo de extracción > relación material-líquido. A y C tienen efectos extremadamente significativos (P < 0,01), D, A2 y C2 tienen efectos significativos (P < 0,05) y otros elementos no tienen efectos significativos.

Mediante el análisis de la superficie de respuesta, se obtuvieron las condiciones óptimas del proceso de extracción: pH de extracción 9,00, relación sólido-líquido 1:15 g/mL, temperatura de extracción 57,00 ℃ y tiempo de extracción 64,01 min. Para facilitar la operación real, las condiciones óptimas del proceso de extracción se ajustaron a un pH de extracción de 9, una relación sólido-líquido de 1:15 g/ml, una temperatura de extracción de 57 °C y un tiempo de extracción de 64 minutos. Se realizó un experimento de verificación en estas condiciones y se midió que la tasa de extracción promedio fue de 4,75, que está cerca del valor previsto. La RSD del 0,98% muestra que los resultados de la prueba de superficie de respuesta son confiables.