1. Alle Probenvorbereitungsprozesse sollten sterilen Arbeitsabläufen folgen. 2. Das Verdünnungsmittel sollte vor dem Test 15 bis 30 Minuten lang vollständig auf 36 ± 1 °C vorgewärmt werden. 3. Gefrorene Proben können nicht länger als 18 Stunden bei 2 °C bis 5 °C oder nicht länger als 15 Minuten bei einer Temperatur von nicht mehr als 45 °C aufgetaut werden. 4. Feste und halbfeste Proben: Wiegen Sie 25 g der Probe unter aseptischen Verfahren ab, geben Sie sie in eine sterile Flasche mit 225 ml Verdünnungsmittel (in der Flasche sind 5 bis 10 sterile Glasperlen voreingestellt) und schütteln Sie sie zweimal mit einem Oszillator , jeweils 30 Sekunden, um eine homogene Probenlösung im Verhältnis 1:10 herzustellen. 5. Flüssige Proben: Schütteln Sie flüssige Proben gründlich und nehmen Sie dann mit einem sterilen Strohhalm 25 ml der Probe auf und geben Sie sie in eine sterile Flasche mit 225 ml Verdünnungsmittel (in der Flasche sind 5 bis 10 sterile Glasperlen voreingestellt). . Mit einem Oszillator zweimal 30 Sekunden lang schütteln, um eine homogene Probenlösung im Verhältnis 1:10 herzustellen.

1. Verwenden Sie eine sterile 1-ml-Pipette oder Mikropipette, um 1 ml der homogenen Probenlösung im Verhältnis 1:10 aufzunehmen, und injizieren Sie diese langsam entlang der Röhrchenwand in ein steriles Reagenzglas mit 9 ml Verdünnungsmittel (beachten Sie, dass die Spitze der Pipette oder Mikropipettenspitze Berühren Sie das Verdünnungsmittel nicht. Schütteln Sie das Reagenzglas mit einem Oszillator dreimal für jeweils 10 Sekunden, um eine homogene Probenlösung im Verhältnis 1:100 herzustellen. 2. Nehmen Sie eine weitere sterile 1-ml-Pipette oder Mikropipettenspitze und führen Sie die Probenhomogenisierung in 10-fachen Schritten gemäß der oben genannten Arbeitsreihenfolge durch. Verwenden Sie für jede schrittweise Verdünnung eine sterile 1-ml-Pipette oder Pipettenspitze.

Gesamtzahl der Milchsäurebakterien

Anzahl der Bifidobakterien

Anzahl der Streptococcus thermophilus

Anzahl der Laktobazillen

Enthält nur Zählungen für Bifidobacterium spp.

Beispiele für Lactobacillus-Arten und Kulturmedien, die zum Nachweis verschiedener Elemente verwendet werden

1. Wählen Sie eine Platte mit einer Koloniezahl zwischen 30 KBE und 300 KBE und ohne sich ausbreitende Kolonien aus, um die Gesamtzahl der Kolonien zu zählen. Notieren Sie bei Platten mit weniger als 30 KBE die spezifische Anzahl der Kolonien und bei Platten mit mehr als 300 KBE die Anzahl der Kolonien als zu viele, um gezählt zu werden. Die Anzahl der Kolonien für jede Verdünnung sollte dem Durchschnitt von zwei Platten entsprechen. 2. Wenn auf einer der Platten größere Flockenkolonien wachsen, sollte diese nicht verwendet werden. Stattdessen sollte die Anzahl der Flockenkolonien bei dieser Verdünnung verwendet werden, wenn die Flockenkolonien weniger als die Hälfte der Platte ausmachen. und die verbleibende Hälfte ist Die Kolonienverteilung ist sehr gleichmäßig, Sie können also die Hälfte der Platte zählen und mit 2 multiplizieren, um die Anzahl der Kolonien auf einer Platte darzustellen. 3. Wenn auf der Platte ein Kettenwachstum ohne erkennbare Grenzen zwischen den Kolonien erscheint, zählen Sie jede einzelne Kette als Kolonie.

1. Wenn die Anzahl der Kolonien auf nur einer Verdünnungsplatte innerhalb des entsprechenden Zählbereichs liegt, berechnen Sie die durchschnittliche Anzahl der Kolonien auf den beiden Platten und multiplizieren Sie dann den Durchschnittswert mit dem entsprechenden Verdünnungsfaktor, um das Ergebnis der Gesamtzahl zu erhalten Kolonien pro Gramm oder pro Milliliter. 2. Wenn die Anzahl der Kolonien auf zwei Serienverdünnungsplatten innerhalb des entsprechenden Zählbereichs liegt, berechnen Sie gemäß Formel (1): N=∑C/(n1 n2)*d In der Formel: N – Anzahl der Kolonien in der Probe; ∑C – Die Summe der Anzahl der Kolonien auf einer Platte (eine Platte, die einen geeigneten Bereich an Koloniezahlen enthält); n1 – Die Anzahl der Platten der ersten Verdünnung (niedriger Verdünnungsfaktor); n2 – Die Anzahl der Platten der zweiten Verdünnung (hohes Verdünnungsverhältnis); d – Verdünnungsfaktor (erste Verdünnung). 3. Wenn die Anzahl der Kolonien auf den Platten aller Verdünnungen größer als 300 KBE ist, zählen Sie die Platte mit der höchsten Verdünnung. Andere Platten können als zu zahlreich zum Zählen erfasst werden. Das Ergebnis wird durch Multiplikation der durchschnittlichen Anzahl der Kolonien berechnet höchster Verdünnungsfaktor. 4. Wenn die Anzahl der Kolonien auf der Platte bei allen Verdünnungen weniger als 30 KBE beträgt, sollte die Berechnung auf der durchschnittlichen Anzahl der Kolonien bei der niedrigsten Verdünnung multipliziert mit dem Verdünnungsfaktor basieren. 5. Wenn auf den Platten aller Verdünnungen (einschließlich der Originallösungen flüssiger Proben) kein Koloniewachstum zu verzeichnen ist, beträgt die Berechnung weniger als 1 multipliziert mit dem niedrigsten Verdünnungsfaktor. 6. Wenn die Anzahl der Plattenkolonien bei allen Verdünnungen nicht zwischen 30 KBE und 300 KBE liegt und einige von ihnen weniger als 30 KBE oder mehr als 300 KBE haben, wird zur Berechnung die durchschnittliche Anzahl der Kolonien, die 30 KBE oder 300 KBE am nächsten kommen, mit dem Verdünnungsfaktor multipliziert .

1. Wenn die Anzahl der Kolonien weniger als 100 KBE beträgt, wird sie nach dem „Rundungsprinzip“ aufgerundet und als ganze Zahl gemeldet. 2. Wenn die Anzahl der Kolonien größer oder gleich 100 KBE ist, wird die dritte Ziffer nach dem „Rundungs“-Prinzip gerundet und die ersten beiden Ziffern werden verwendet und die folgenden Ziffern werden durch 0 ersetzt die Form eines Exponenten von 10, nach dem „Rundungs“-Prinzip. Verwenden Sie nach dem Runden zwei signifikante Ziffern. 3. Die Gewichtsprobenahme wird in KBE/g und die volumetrische Probenahme in KBE/ml angegeben.

Auf der Grundlage der Ergebnisse der Kolonienzählung wird ein Bericht erstellt, und die Berichtseinheit wird in KBE/g (ml) ausgedrückt.

MRS-Kulturmedium: Pepton, Rindfleischextraktpulver und Hefeextraktpulver liefern Stickstoffquellen, Vitamine, Mineralien und andere Nährstoffe, die für das Bakterienwachstum benötigt werden; Glukose dient als fermentierbare Kohlenstoffquelle 80, Triammoniumcitrat und Natriumacetat können das Wachstum von Milchsäurebakterien fördern und zytotoxische Substanzen neutralisieren; Phosphat dient als Puffer;

MC-Kulturmedium: Sojapepton, Rindfleischextraktpulver und Hefeextraktpulver liefern Stickstoffquellen, Kohlenstoffquellen, Vitamine, Mineralien und andere Nährstoffe, die für das Bakterienwachstum benötigt werden; Glukose und Laktose dienen als Kohlenhydrate zur Förderung des Wachstums von Milchsäurebakterien und Kalzium Carbonat Neutralisiert die durch den Bakterienstoffwechsel erzeugte Säure, um deren Säuretoxizität für Zellen zu verringern. Neutralrot dient als Säure-Base-Indikator. Das Kulturmedium enthält 10 g/L Calciumcarbonat, das eine unlösliche Substanz ist gründlich vermischen. Sobald alles homogen ist, auf den Teller gießen. Gleichzeitig ist es normal, dass sich auf der Platte ein weißer Niederschlag bildet.

Modifiziertes MRS-Medium aus Mupirocin-Lithiumsalz und Cysteinhydrochlorid: Pepton, Rindfleischextraktpulver und Hefeextraktpulver liefern Stickstoffquellen, Kohlenstoffquellen, Vitamine, Mineralien und andere Nährstoffe, die für das Bakterienwachstum benötigt werden; Manganionen, Magnesiumionen, Tween 80, Triammoniumcitrat und Natriumacetat können das Wachstum von Milchsäurebakterien fördern und zytotoxische Substanzen neutralisieren; Phosphat dient als Puffer; Mupirocin-Lithiumsalz hemmt andere Milchsäurebakterien außer Bifidobacterium; Cysteinhydrochlorid wirkt als Reduktionsmittel.