Mindmap-Galerie 6Mikrobiologische Tests
Dies ist eine Mindmap zur Lebensmittelmikrobiologie – 6 Mikrobentests, einschließlich Bestimmung der Mikrobenmenge, Probenentnahme und -verarbeitung, Bioanalyse und verwandte Technologien usw.
Bearbeitet um 2024-01-20 17:23:40Einhundert Jahre Einsamkeit ist das Meisterwerk von Gabriel Garcia Marquez. Die Lektüre dieses Buches beginnt mit der Klärung der Beziehungen zwischen den Figuren. Im Mittelpunkt steht die Familie Buendía, deren Wohlstand und Niedergang, interne Beziehungen und politische Kämpfe, Selbstvermischung und Wiedergeburt im Laufe von hundert Jahren erzählt werden.
Einhundert Jahre Einsamkeit ist das Meisterwerk von Gabriel Garcia Marquez. Die Lektüre dieses Buches beginnt mit der Klärung der Beziehungen zwischen den Figuren. Im Mittelpunkt steht die Familie Buendía, deren Wohlstand und Niedergang, interne Beziehungen und politische Kämpfe, Selbstvermischung und Wiedergeburt im Laufe von hundert Jahren erzählt werden.
Projektmanagement ist der Prozess der Anwendung von Fachwissen, Fähigkeiten, Werkzeugen und Methoden auf die Projektaktivitäten, so dass das Projekt die festgelegten Anforderungen und Erwartungen im Rahmen der begrenzten Ressourcen erreichen oder übertreffen kann. Dieses Diagramm bietet einen umfassenden Überblick über die 8 Komponenten des Projektmanagementprozesses und kann als generische Vorlage verwendet werden.
Einhundert Jahre Einsamkeit ist das Meisterwerk von Gabriel Garcia Marquez. Die Lektüre dieses Buches beginnt mit der Klärung der Beziehungen zwischen den Figuren. Im Mittelpunkt steht die Familie Buendía, deren Wohlstand und Niedergang, interne Beziehungen und politische Kämpfe, Selbstvermischung und Wiedergeburt im Laufe von hundert Jahren erzählt werden.
Einhundert Jahre Einsamkeit ist das Meisterwerk von Gabriel Garcia Marquez. Die Lektüre dieses Buches beginnt mit der Klärung der Beziehungen zwischen den Figuren. Im Mittelpunkt steht die Familie Buendía, deren Wohlstand und Niedergang, interne Beziehungen und politische Kämpfe, Selbstvermischung und Wiedergeburt im Laufe von hundert Jahren erzählt werden.
Projektmanagement ist der Prozess der Anwendung von Fachwissen, Fähigkeiten, Werkzeugen und Methoden auf die Projektaktivitäten, so dass das Projekt die festgelegten Anforderungen und Erwartungen im Rahmen der begrenzten Ressourcen erreichen oder übertreffen kann. Dieses Diagramm bietet einen umfassenden Überblick über die 8 Komponenten des Projektmanagementprozesses und kann als generische Vorlage verwendet werden.
Mikroorganismen in Lebensmitteln und ihre Nachweis von Metaboliten
Bestimmung der Keimzahl
Standardtelleranzahl SPC
Experimentierprozess
Probenahme
Verdünnung
zehnfache Verdünnung
Inokulation: 2-3 Reihenverdünnungen, parallele Kontrollen
Gießmethode
Beschichtungsmethode
Erkennt hitzeempfindliche Bakterien
Eher geeignet für streng aerobe Bakterien
Die Koloniemorphologie ist offensichtlich und die Gruppenmerkmale können beobachtet werden.
Nicht zu verwechseln mit Speiseresten
Kolonien neigen dazu, sich zu überlappen und zu vermischen
nähren
mittel, Bedingungen
Invertierte Kultur: mittlerer Gewichtsverlust weniger als 15 %
Verhindern Sie, dass Wassertropfen tropfen
Verhindern Sie das Wachstum von Bakterien
Kolonienzahl
Wählen Sie eine Platte mit geeigneter Bakterienkolonienzahl, 30 bis 300 KBE für Bakterien und 10 bis 150 KBE für Schimmel/Hefe.
Methoden: Beobachtung mit bloßem Auge, Koloniezählung
Kolonien identifizieren: Kolonien sind zu klein oder ähneln Probenpartikeln – Farbstoffreduktionsmethode, TTC (rotes Tetrazolium, chromogenes Medium), bakterielle Eigenschaften
Berechnung
Bericht, zwei signifikante Zahlen, Blindkontrolle hat ungültige Kolonietestergebnisse
Bedeutung
Bestimmen Sie den Grad der mikrobiellen Kontamination und die Hygienequalität
Sagen Sie die Haltbarkeit von Lebensmitteln voraus
spiegeln Frische wider
Überwachen Sie die Wachstums- und Reproduktionsdynamik
Biologische Produktprüfung: Kontamination, Probiotika
Andere Methoden
Hydratisiertes Trockenfilm-Kulturmedium
Prinzip: Vorgefertigtes Kulturmediumsystem, erneuerbarer Hydratations-Trockenfilm, Kulturmedium, kaltwasserlösliches Gel, Indikator, gedrucktes Gitter
Arbeitsschritte: Verdünnung, Inokulation, Kultur, Zählung, Berichterstattung
Vorteil
Hohe Produktivität
Kleiner Fehler
Internationalisierung: Genehmigung durch offizielle Stellen
Schnell: 6–14 Stunden können genaue Ergebnisse innerhalb von 24 Stunden schätzen 3–5 Tage, um die Schimmel- und Hefezahl zu bestätigen
Identifikationsmedium
Rotationsimpfmethode
Beimpfen Sie die Probe entsprechend der archimedischen Spirale als Inokulationsbahn mit abnehmender Geschwindigkeit
Automatische Spiralimpfung, Zählsystem
Zählmethode: Es gibt mehr Kolonien in der Mitte und weniger um sie herum. Berechnen Sie die Anzahl der Kolonien pro Flächeneinheit.
Vorteil
Die Messergebnisse korrelieren stark mit der SPC
Mangel
Methode zur Bestimmung der nächstgelegenen Nummer MPN
Nutzen Sie die besonderen physiologischen Funktionen der zu testenden Mikroorganismen und verwenden Sie selektive Kulturmedien (zur Reduzierung von Interferenzen), um das Vorhandensein und die Häufigkeit von Mikroorganismen zu bestimmen.
Nachweis von Mikroorganismen mit ernährungsphysiologischen und metabolischen Eigenschaften wie z. B. Kolibakterien
Einfach zu verwenden
Es können Mikroorganismen gemessen werden, die in der mikrobiellen Gemeinschaft nicht dominant sind
Kolibakterien
Darmbakterien im Zusammenhang mit fäkaler Kontamination
Aerobe und fakultativ anaerobe negative Nicht-Saccharomyces-Bakterien, die unter bestimmten Kulturbedingungen Laktose fermentieren, um Säure und Gas zu produzieren.
Primärvergärung: LST, Nachvergärung BGLB für Gaserzeuger
Die Bedeutung des Nachweises von E. coli
Indikatorbakterien für fäkale Kontamination zur Bewertung der Qualität der Lebensmittelhygiene
Bewerten Sie das Potenzial einer Kontamination durch enterisch pathogene Bakterien wie Salmonellen und Shiga
Vorteile als Indikatorbakterien
Viele Quellen, große Mengen, hohe Erkennungsrate
Die äußere Überlebenszeit ist grundsätzlich gleich
Die Resistenz gegen Fungizide ist grundsätzlich gleich
Einfach zu bedienen, keine komplizierte Ausrüstung erforderlich
hohe Empfindlichkeit
Methode zur Zählung der Farbstoffreduktion (Schätzmethode)
Prinzip: Lebende Zellen enthalten Reduktase-Enzyme, die bestimmte Brennstoffe von einer Farbe in eine andere umwandeln können.
Häufig verwendete Reagenzien
Methylenblau
blau bis weiß
Resazurin
Dunkelblau wird zu Rosa, Weiß
Tetrazol
Farblos bis rot
Die Reduktionszeit ist umgekehrt proportional zur Mikrobenkonzentration und wird häufig für die Milchhygiene und die Spermienaktivität genutzt.
Vorteil
Einfach, schnell und wirtschaftlich
Mangel
Die Reduktionsfähigkeit von Mikroorganismen ist unterschiedlich und schwer abzuschätzen. Für Lebensmittel, die Reduktasen enthalten, ist sie nicht geeignet.
Direkte mikroskopische Zählmethode DMC
Zähltafel Direktzählung
Petrovholzer-Zellzählkammer (allgemeine Bakterien), Hämozytometer (Hefe-/Schimmelpilzsporen)
Zählt die Anzahl der Mikroorganismen in einem bestimmten Volumen, kann jedoch verschiedene Bakterien nicht unterscheiden
Vorteil
Schnelle, bequeme Analyse der Zellmorphologie, Objektträger einfach zu speichern
Mangel
Nur für Proben mit hohem Bakteriengehalt, geringer Genauigkeit und leichter Ermüdung geeignet.
Andere Methoden
Wattestäbchen-Abstrichmethode, Probenahmemethode
Nachweis von Oberflächenmikroorganismen
Wird auf Lebensmittel, Geräteoberflächen und öffentliche Plätze aufgetragen
Membranfiltrationsmethode, Probenkonzentration
Proben mit sehr wenig Bakterien können die Bakterien anreichern und die Nachweisrate verbessern.
Nicht durch Probenvolumen begrenzt
Nachweismethode: SPC, mikroskopische Zählung, kombiniert mit Färbemethode
Physikalische, chemische, molekulare und immunologische Methoden
Physik
Impedanzmessung
Impedanz
In biologischen Materialien mit Widerstand, Induktivität und Kapazität wird die Impedanz, die die Strommessung behindert, als Impedanz bezeichnet.
Prinzip: Mikroorganismen verändern die elektrischen Eigenschaften des Kulturmediums und das elektrisch inerte Substrat zerfällt in elektroaktive Moleküle und Ionen. Die Leitfähigkeit des Kulturmediums nimmt zu und die Impedanz nimmt ab.
Änderungen der Leitfähigkeit im Laufe der Zeit
Nachweiszeit: die Zeit von der Kultur bis zur plötzlichen Änderung des Impedanzwerts, umgekehrt proportional zur ursprünglichen Bakterienzahl
Ableitung der ursprünglichen Keimzahl von Mikroorganismen
Mikroorganismen haben unterschiedliche Impedanzkurven
Mikrobielle Identifizierung
direkte Impedanzmethode
Das Kulturmedium wird in ein spezielles Messröhrchen gegeben. Nach der Beimpfung mit Mikroorganismen werden Elektroden in das Kulturmedium eingeführt, um Änderungen der elektrischen Eigenschaften des Kulturmediums direkt zu messen.
Schlüsselfaktoren, Kulturmedium
Die getesteten Bakterien➕erzeugen überwachbare Impedanzänderungen
indirekte Impedanzmethode
Der mikrobielle Stoffwechsel erzeugt Kohlendioxid usw., um die Stoffwechselaktivität von Mikroorganismen widerzuspiegeln
Kohlendioxid gelangt in das Reagenzglas und reagiert mit Kaliumhydroxid unter Bildung von Carbonat, das seine Leitfähigkeit verringert und die Änderung der Leitfähigkeit aufzeichnet.
Vorteil
Keine Optimierung des Kulturmediums erforderlich (kann ohne Strom reagieren)
Kann Medien mit hohem Salzgehalt messen
Messbare Mikroorganismen, die nur sehr geringe oder keine messbare Änderung der Leitfähigkeit hervorrufen, wie z. B. Hefe
Das messbare Lebensmittel selbst kann die Impedanzmessung stören oder sogar die Elektroden beschädigen.
Mikrokalorimetrie
Chemisch
Bestimmung von ATP
Energiequelle für lebende Zellen, verschwindet zwei Stunden nach dem Zelltod
Zellulares ATP ist konstant und seine Gesamtmenge ist proportional zur Anzahl der Bakterien, die berechnet werden kann
Der ATP-Gehalt prokaryotischer exponentiell wachsender Zellen beträgt normalerweise 2–6 nmol/mg Trockengewicht.
Genaue Messung von ATP in Zellen derselben Spezies
Gängige Methoden – Messung von ATP durch das Luciferase-System
ATP ist am Luciferin-Luciferase-System beteiligt und bewirkt, dass Luciferin Licht emittiert. Die emittierte Lichtmenge ist proportional zu ATP
Berechnen Sie die Zellzahl anhand der Lumineszenzintensität
Es kann schnell automatisch messen und erkennen. Die Ergebnisse stimmen mit der SPC-Methode überein und sparen Zeit.
Anwendung
Bestimmung der Bakterienzahl in Fermentationsbrühe
Untersuchung einer Urinprobe
Oberflächenmikrobiologischer Test
Radiometrie
Prinzip: Bakterien produzieren Kohlendioxid, wenn sie Kohlenhydrate verstoffwechseln, Spurenelemente in Glukose oder andere Zuckermoleküle umwandeln und das freigesetzte Kohlendioxid erkennen
Die Strahlungsmenge ist proportional zur Anzahl der Bakterien
Die Nachweiszeit ist umgekehrt proportional zur Anzahl der Mikroorganismen
Zähler für radioaktive Energie
Anwendung
Überprüfen Sie, ob Magenprobleme vorliegen, indem Sie Luft einblasen
Lebensmittelmikrobiologische Tests
Fingerabdruck und Identifizierung von Lebensmittelmikroorganismen
Fingerabdruck: Charakteristische chemische Komponenten, Strukturen, Leistungsunterschiede und spezifische Metaboliten
Charakteristisches Muster: identifizierbar, einzigartig
Erkennung von Nukleinsäuren
16srRNA-Basensequenz
rRNA macht 80 % der gesamten RNA aus
Viele Segmente sind hochkonserviert
Timer für die biologische Evolution
phylogenetische Karte
PCR
Polymerase-Kettenreaktion, zellfreies Klonen, eine molekularbiologische Technik, die spezifische DNA-Fragmente außerhalb von Zellen amplifiziert
Nachweis pathogener Bakterien: spezifische Fragmente, Konservierung
Prinzip: Bei der Katalyse der DNA-Polymerase wird die Mutterstrang-DNA als Matrize verwendet und spezifische Primer werden als Ausgangspunkt für die Verlängerung verwendet. Durch Schritte wie Denaturierung, Annealing und Verlängerung wird der Prozess der In-vitro-Kopierung der Tochter durchgeführt Es wird eine zur Matrizen-DNA komplementäre Strang-DNA durchgeführt.
Reaktionskomponenten
Template-DNA: Zielgen – ein für den Mikroorganismus einzigartiges Gen
Primerpaar: Startpunkt und Endpunkt der Replikation, Spezifität der Replikation
dNTP:A,T,G,C
DNA-Polymerase
Reaktionspuffer, Magnesiumsalzlösung
Vorteil
In-vitro-Amplifikation spezifischer Nukleinsäurefragmente
Schnell, einfühlsam und spezifisch
Automatisches mikrobielles Analysesystem
Vollautomatische mikrobielle Analyse
Prinzip: Das Gerät fixiert das für die Bakterienidentifizierung erforderliche biochemische Reaktionskulturmedium auf der Karte. Nach der Kultur beurteilt das Gerät die angezeigte Reaktion und führt die Bestimmung mithilfe der numerischen Methode durch.
Gram-negative Bakterienkarte, Gram-positive Bakterienkarte, Hefekarte
API-System zur Identifizierung von Bakterien
immunologische Methoden
Antigen (Ag): Eine Substanz, die das Immunsystem dazu veranlassen kann, eine Immunantwort hervorzurufen und spezifisch mit den Antikörpern oder Effektorzellen zu reagieren, die es in vivo oder in vitro produziert.
Antigene Determinanten: aktive Gruppen auf der Oberfläche eines Antigens
Antigene Eigenschaften
Antigenität: Immunogenität und Reaktogenität
Heterogenität: Protein, Zucker, Nukleinsäure (chemische Zusammensetzung), 5-10ku schlechte Immunwirkung (Molekulargewicht)
Antikörper (Ab): Eine Art Wirkstoff, der spezifisch mit dem Antigen reagieren kann, das von B-Zellen synthetisiert und abgesondert wird, wenn das Antigen in den Körper gelangt. Es kommt hauptsächlich im Serum vor.
Antigen- und Antikörper-Nachweismethoden: Nachweis von Bakterien oder Toxinen
Agglutinationsreaktion
Bekannte Antikörper identifizieren Antigene
Das körnige Antigen bindet an den entsprechenden Antikörper und nach einer gewissen Zeit in Gegenwart eines Dielektrikums erscheinen mit bloßem Auge kleine agglutinierte Stücke.
Fällungsreaktion
Neutralisierungsreaktion
Markierte Antikörper- oder Antigen-Technologie
Salmonellen 1-2 Experiment
Prinzip: Wird in zwei speziellen Behältern durchgeführt, von denen einer ein selektives flüssiges Medium und der andere ein nicht selektives halbfestes Medium enthält
Antigen und Antikörper verbinden sich zu einem mit bloßem Auge sichtbaren Immunband
Enzyme-linked Immunosorbent Assay ELISA
Partikelantigen: wie Bakterien, Viren usw.
Lösliche Antigene: Enterotoxine, Mykotoxine usw.
qualitativ oder quantitativ
Einfache und schnelle Bedienung
Experimentelles Prinzip
Enzyme binden an Antikörper oder Antigene
spezifische Reaktion zwischen Antigen und Antikörper
Enzymkatalysierte Substratfarbentwicklung, qualitative oder quantitative Analyse mit bloßem Auge oder Instrumenten
Spezifität ➕ Enzymsignalverstärkung
Benötigtes Material
solide Unterstützung
Enzymmarkiertes Antigen oder Antikörper
Meerrettichperoxidase, gute Stabilität
alkalische Phosphatase
Substrat für die Enzymwirkung
O-Phenylendiamin (gelb)
Tetramethylbenzidin (blau)
Typ
Direkte Methode, indirekte Methode, Sandwich-ELISA: Bestimmung von Partikelantigen
Wettbewerbsmethode: Bestimmung niedermolekularer Antigene wie Mykotoxine
Sandwich-ELISA (Sandwich-ELISA)
①Beschichtung: Antikörper 1 ② Waschen: Überschüssige und schwach gebundene Reagenzien entfernen ③Zu prüfende Proben hinzufügen; ④ Waschen; ⑤Enzymmarkierten Antikörper 2 hinzufügen; ⑥ Waschen; ⑦Substrat hinzufügen; ⑧ Abbruchreaktion
Vorteil
Kann mehrere Proben gleichzeitig erkennen, kann automatisiert, einfach bedient und kommerzialisiert werden
kolloidale Goldchromatographie
Prinzip
Limulus (hou)-Reagenzassay
Empfindliche Methode zur Bestimmung von Endotoxinen in Zellwänden negativer Bakterien
Prinzip: Reaktion zwischen Endotoxin und im Pfeilschwanzkrebs gelösten Lysaten zur Bildung eines Gels, qualitativ oder semiquantitativ
Bioanalyse und verwandte Technologien
Auswahl von Versuchstieren
Empfindlichkeit gegenüber Testsubstanz, Geschlecht, Alter, Gewicht
Methode zur Verabreichung der Testsubstanz
Fütterung; Ernährung, Trinkwasser
Orale Verabreichung, Kapsel
Injektion: intraperitoneal, subkutan
Operation
Botulinumtoxin-Test
Chirurgische Eingriffe im Tierversuch
Ligationsring-Technologie
Probensammlung und -verarbeitung
Zu befolgende Probenahmeprinzipien
Bestimmen Sie den Probenahmeplan: Ohrstufe zwei, Stufe drei
Repräsentativität: zufällig durchgeführt, repräsentativ für alle Lebensmittel
Aseptischer Betrieb zur Vermeidung von Kontaminationen
Originalzustand beibehalten: Verflüchtigung, Temperatur
Just-in-time: Bemusterung und Versand zur Prüfung
Probenahmeplan
Typ
Probenahme
n: Die Anzahl der Proben, die für dieselbe Produktcharge gesammelt werden sollen
Ergebnisurteil
c: Der maximal zulässige Probenwert, der den m-Wert überschreitet
m: Grenzwert des akzeptablen Niveaus mikrobieller Indikatoren
MDer maximale Sicherheitsgrenzwert mikrobiologischer Indikatoren
Level 2
Stufe drei
Lebensmittelgefährdung
Gefahren der Kategorie I, Lebensmittel für ältere Menschen, Säuglinge und Kleinkinder sowie Lebensmittel, die vor dem Verzehr die Gefahr erhöhen können
Gefahren der Kategorie II, Lebensmittel, die sofort verzehrt werden, die Gefahren bleiben vor dem Verzehr grundsätzlich unverändert
Gefahren der Kategorie III: Lebensmittel, die vor dem Verzehr erhitzt wurden, um Gefahren zu reduzieren
Bedeutung der Inspektionsindikatoren für Lebensmittel: allgemein, mittel, schwer